Kreuztests: Wozu dienen sie, Technik und Grundlagen, Phasen

Die Kreuztests sind eine Reihe von Laborstudien, die durchgeführt werden, um festzustellen, ob die Blutprodukte eines Spenders (hauptsächlich Vollblut und Kugelkonzentrat) mit dem Blut des Empfängers kompatibel sind.

Es ist ein ergänzender Test neben der ABO-Verträglichkeit und dem Rh-Faktor. Der Grund für Kreuztests ist, dass manchmal zwei Personen (Spender-Empfänger) die gleiche ABO- und Rh-Gruppe haben, aber ihr Blut immer noch nicht kompatibel ist.

Eine solche Inkompatibilität ist auf das Vorhandensein von Antikörpern gegen eine Reihe von Proteinen roter Blutkörperchen zurückzuführen, die als geringfügige Antigene bekannt sind. Diese Antigene werden nicht routinemäßig ausgewertet, wie dies bei Blutgruppen (ABO) und Rh-Faktor der Fall ist.

Dies liegt daran, dass die Nebenantigene viel seltener vorkommen und in jedem Individuum eine variable Expression aufweisen, weshalb es praktisch unmöglich ist, sie in Kategorien zu gruppieren, wie dies mit der Gruppe und dem Rh-Faktor der Fall ist.

Stattdessen werden die roten Blutkörperchen des Spenders mit dem Serum des Patienten (Hauptverträglichkeitstest) und die roten Blutkörperchen des Patienten mit dem Spenderserum (Nebenverträglichkeitstest) gemischt, um das Vorhandensein von Antigen-Antikörper-Reaktionen nachzuweisen.

Wenn Antikörper gegen kleinere Antigene im Serum des Patienten oder des Spenders vorhanden sind, wird der Test als positiv bezeichnet, sodass in den meisten Fällen eine bestimmte Bluteinheit nicht transfundiert werden kann.

ABO Group

Um zu verstehen, dass Kreuzreaktionen zuerst behandelt werden, müssen die Grundlagen der Blutgruppen bekannt sein.

In diesem Sinne ist es am wichtigsten zu wissen, dass Blut in vier Gruppen eingeteilt werden kann: A, B, AB und O.

Jede dieser Gruppen exprimiert auf der Oberfläche der roten Blutkörperchen ein bestimmtes Protein (Antigen), das von den Antikörpern eines potentiellen Rezeptors einer anderen Gruppe als Fremdelement identifiziert wird.

Die auffälligste der Antigen-Antikörper-Reaktionen in Bezug auf die Blutverträglichkeit ist, dass keine vorherige Exposition mit dem Antigen erforderlich ist, damit Antikörper existieren. Dies ist als natürliche Antikörper bekannt.

Natürliche Antikörper

Im Allgemeinen ist es für die Existenz von Antikörpern im Körper eines Individuums erforderlich, dass die weißen Blutkörperchen zuvor dem Antigen ausgesetzt wurden.

Dies bedeutet, dass beim ersten Kontakt zwischen dem Fremdantigen und dem Organismus keine Antikörper vorhanden sind, da diese später nach dem ersten Kontakt erzeugt werden. Daher ist es für das Immunsystem unmöglich, Antikörper gegen beispielsweise ein bestimmtes Virus zu haben, wenn es ihm in der Vergangenheit nicht ausgesetzt war.

Die einzige Ausnahme bilden die Anti-AB-Antigene. In diesen Fällen hat die Person Antikörper gegen das Antigen, die ihre roten Blutkörperchen nicht aufweisen, selbst wenn sie noch nie mit den roten Blutkörperchen einer anderen Person in Kontakt gekommen sind. Dies ist als natürliche Antikörper bekannt.

Antigene und Antikörper, die mit der Blutgruppe verwandt sind

Die Blutgruppen werden im Falle des ABO-Systems durch das Vorhandensein spezifischer Antigene (A oder B) in der Membran der roten Blutkörperchen und im Gegensatz dazu von Antikörpern gegen das in der Erythrozytenmembran fehlende Antigen bestimmt.

So exprimiert eine Person mit Blutgruppe A Antigen A auf der Oberfläche ihrer roten Blutkörperchen, während sich im Serum Anti-B-Antikörper befinden.

Im Gegensatz dazu wird bei Patienten der Gruppe B Antigen B gefunden, während Antikörper Anti-A sind.

Jetzt haben Patienten mit AB-Blut sowohl A- als auch B-Antigene, daher gibt es keine Antikörper, da dies die roten Blutkörperchen dieser Person zerstören würde.

Das Gegenteil tritt in Gruppe O auf, wo die Erythrozytenmembran keines der beiden Antigene (weder A noch B) präsentiert, während im Serum Anti-A- und Anti-B-Antikörper vorhanden sind.

Inkompatibilität der ABO-Gruppe

Daraus kann leicht auf die Verträglichkeit der ABO-Blutgruppen geschlossen werden, da das Antigen der Erythrozytenmembran automatisch bekannte Antikörper im Serum ist. Also:

- Blut A ist kompatibel mit Gruppe A und Gruppe O.

- Blutgruppe B ist kompatibel mit Blut B und O.

- Menschen mit Gruppe O können nur Blut O erhalten (da sie Anti-A- und Anti-B-Antikörper haben), obwohl ihr Blut von allen anderen Gruppen problemlos aufgenommen wird, da es keine Antigene enthält.

- Endlich. Diejenigen, die Blutgruppe AB haben, können Blut von allen anderen Gruppen (A, B, O und natürlich AB) erhalten, da sie keine Antikörper gegen eines der Antigene haben. Allerdings können nur AB-Personen AB-Blut erhalten, da alle anderen Gruppen Antikörper haben, die diese roten Blutkörperchen zerstören würden.

Kleinere Antigene

Wie bei den ABO-Gruppen befindet sich auf der Oberfläche der Erythrozyten eine Reihe von Proteinen, die als Antigene fungieren, wie dies bei den Antigenen der ABO-Gruppe der Fall ist.

Diese Antigene kommen jedoch nicht bei allen Individuen vor. Seine Kombination ist heterogen und die Penetranz (Expressionsgrad des Proteins) ist variabel, daher ist es unmöglich, es in Gruppen wie die für ABO und Rh existierende einzuteilen. Von dort leitet es seinen Namen von "Nebenantigenen" ab, die auch als "Antigene mit geringer Inzidenz" bezeichnet werden.

Obwohl sie nicht häufig sind, gibt es möglicherweise natürliche Antikörper gegen kleinere Antigene. Unter ihnen sind Lewis, MNSs, Anti-N, Kell, Duffy, Anti-Fyb und Kidd am häufigsten. Sie alle sind für sehr schwere hämolytische und posttransfusionsbedingte Reaktionen verantwortlich.

Darüber hinaus kann es Fälle von Sensibilisierung gegen geringfügige Antigene durch vorherigen Kontakt geben, entweder mit den antigenen Proteinen aufgrund vorheriger Transfusionen oder aufgrund von Kreuzimmunität.

Immunität überwinden

Es wird gesagt, dass es eine Kreuzimmunität gibt, wenn zwei Antigene aus zwei verschiedenen Quellen (zum Beispiel ein rotes Blutkörperchen und ein Bakterium) sehr ähnlich sind, so dass die Antikörper gegen eines der genannten antigenen Proteine ​​auch mit dem anderen reagieren, weil sie nahezu identisch sind .

Um es besser zu verstehen, nehmen Sie das vorhergehende hypothetische Beispiel (Antigene von roten Blutkörperchen und Bakterien). In keinem Fall existieren natürliche Antikörper, aber wenn eine Person den Bakterien ausgesetzt ist, werden sie Antikörper dagegen erzeugen.

Solche Antikörper reagieren später gegen ein rotes Blutkörperchen, wenn die Antigene dieses sehr ähnlich zu denen der Bakterien sind, die die Bildung der Antikörper induziert haben.

In diesem Fall können die roten Blutkörperchen mit diesem bestimmten antigenen Protein nicht an die Person verabreicht werden, die über die Antikörper verfügt, da dies zu einer Abstoßung führen würde. Hier liegt die Bedeutung von Kreuzreaktionen.

Wofür sind die Kreuztests?

Da es unmöglich ist, das Blut verschiedener Individuen auf der Basis der Nebenantigene in Gruppen zu charakterisieren, kann nur durch Kreuztests festgestellt werden, ob im Blut einer Person Antikörper gegen die Nebenantigene der roten Blutkörperchen einer anderen Person vorhanden sind .

In den Fällen, in denen die Antikörper vorhanden sind, wird eine Hämolyse- oder Agglutinationsreaktion ausgelöst, so dass der Schluss gezogen wird, dass die Reaktion positiv war; Das heißt, es gibt Antikörper gegen kleinere Antigene (obwohl nicht genau bekannt ist, was). Ansonsten ist der Test negativ.

Stiftung

Die Kreuztests basieren auf der Antigen-Antikörper-Reaktion. Mit ihnen ist es daher möglich festzustellen, ob sich im Serum eines Rezeptors Antikörper gegen die Antigene der roten Blutkörperchen des Spenders befinden (oder umgekehrt), die eine Antigen-Antikörper-Reaktion auslösen.

Wenn keine Antikörper vorhanden sind, tritt keine Reaktion auf und der Test wird als negativ gemeldet. Umgekehrt kann bei positiver Reaktion (Hämolyse oder Agglutination während des Tests) auf die Anwesenheit der Antikörper geschlossen werden.

In diesem Zusammenhang ist zu beachten, dass sowohl im Spender- als auch im Empfängerserum möglicherweise Antikörper gegen rote Blutkörperchen vorhanden sind. Aus diesem Grund gibt es zwei Arten von Kreuzreaktionen.

Arten von Kreuzreaktionen

Es ist möglich, dass das Patientenserum Antikörper gegen Spendererythrozyten enthält. Es kann aber auch das Gegenteil der Fall sein, nämlich Antikörper im Serum des Spenders gegen die roten Blutkörperchen des Patienten.

Deshalb gibt es zwei Arten von Kreuztests:

- Größerer Kreuztest.

- Kleiner Kreuztest.

Beide Arten werden routinemäßig in der Blutbank vor der Transfusion von Blutprodukten durchgeführt, da bei einem positiven Test ein hohes Risiko für Transfusionsreaktionen besteht, die das Leben des Patienten gefährden können.

Größerer Kreuztest

In diesem Test wird bewertet, ob im Serum des Empfängers Antikörper gegen die roten Blutkörperchen des Spenders vorhanden sind.

In diesem Fall können die Blutprodukte nicht verabreicht werden, da eine große Anzahl von Antikörpern im Plasma des Patienten die roten Blutkörperchen des Spenders sehr schnell zerstören und dabei katastrophale Reaktionen im Körper des Empfängers hervorrufen. Diese Reaktionen sind so schwerwiegend, dass sie Ihr Leben bedrohen können.

Kleiner Kreuztest

In diesem Fall wird festgestellt, ob das Spenderserum Antikörper gegen die roten Blutkörperchen des Empfängers enthält.

In diesem Fall beginnen die Antikörper, die Erythrozyten des Rezeptors zu zerstören. Da jedoch die Menge an Antikörpern begrenzt ist, ist die Reaktion von geringerer Intensität; obwohl es immer noch gefährlich ist.

Phasen

Sowohl der Haupt- als auch der Nebenkreuztest sind in drei Phasen unterteilt:

- Salina.

- Thermische oder Inkubation.

- Schimpansen.

In der ersten Phase werden rote Blutkörperchen und Serum in Kochsalzlösung gemischt. Danach wird Albumin zugegeben und die Probe 30 Minuten bei 37ºC inkubiert, um schließlich mit der Coombs-Phase fortzufahren.

Technik

Die Technik des Kreuztests ist relativ einfach, da rote Blutkörperchen des Spenders zum Serum des Patienten (Hauptkreuztest) und Erythrozyten des Empfängers zum Serum des Spenders (Nebenkreuztest) hinzugefügt werden.

Um die Antigen-Antikörper-Reaktion in relativ kurzer Zeit auszulösen, müssen eine Reihe standardisierter Schritte befolgt werden. Diese Schritte werden im Folgenden vereinfacht zusammengefasst.

Es ist wichtig zu beachten, dass im folgenden Abschnitt der Test der besseren Verträglichkeit beschrieben wird, obwohl die Schritte für den Test der geringen Verträglichkeit dieselben sind, aber der Ursprung der roten Blutkörperchen und des Serums ausgetauscht wird.

Salzphase

- In ein Reagenzglas 2 Tropfen Serum vom Empfänger geben (vom Spender, wenn es sich um den kleinen Kreuztest handelt).

- Nehmen Sie eine Probe der roten Blutkörperchen des Spenders (vom Empfänger, wenn es sich um den kleinen Kreuztest handelt).

- Waschen und zentrifugieren Sie die roten Blutkörperchen.

- In einer Lösung zwischen 3% und 5% resuspendieren.

- Geben Sie einen Tropfen dieser Lösung in das Röhrchen mit dem Serum des Empfängers.

- Vorsichtig mischen.

- Zentrifuge.

- Lesen Sie das Ergebnis in der Anzeigelampe ab.

Thermische Phase

- 2 Tropfen 22% iges Albumin in das Röhrchen geben, in dem die Salzphase abgeschlossen war.

- 30 Minuten bei 37 ° C inkubieren.

- 15 Sekunden zentrifugieren.

- Lesen Sie das Ergebnis in der Anzeigelampe ab.

Coombs-Phase

- Nehmen Sie die Zellen aus dem Röhrchen und waschen Sie sie mit Kochsalzlösung.

- Entfernen Sie den Überstand.

- Fügen Sie zwei Tropfen Coombs-Reagenz hinzu.

- Vorsichtig mischen.

- 15 bis 30 Sekunden zentrifugieren.

- Die Zellen resuspendieren und in der Visualisierungslampe auf Agglutination oder Hämolyse untersuchen.

Wenn in einer der Phasen eine Agglutination oder Hämolyse auftritt, wird das Ergebnis als positiv gewertet.